什么是逆转录病毒包装服务:
10cm大皿接种5×106个Plat-E细胞,加入10ml含10%FBS的DMEM培养基过夜,12h后显微镜下观察细胞密度80%-90%为宜。15ug目的质粒和500ulOpti-MEM培养基混合,同时45ug转染试剂和500ulOpti-MEM培养基混合,5min后转染试剂Opti-MEM加至质粒Opti-MEM中,静置20min,将混合物滴入Plat-E细胞中混匀,37℃5%CO2培养箱中培养,8-10h后更换新鲜DMEM培养基。转染48h,72h后收集病毒上清,0.44um滤器过滤-80℃保存。
慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种,它能够将靶基因导入到一些较难转染的细胞,如原代细胞等,并且将靶基因随机整合到宿主的基因组中,从而大大增加了转染效率,并且能够在细胞系中稳定表达若干代,可以进行稳转细胞株的筛选。因为是随机整合,也有不确定因素,有些公司还能提供定点整合技术,将靶基因定点整合到基因组特定的部位,从而保证其高效表达并且对细胞不产生随机整合可能产生的伤害。
慢病毒载体基因组是正链RNA,其基因组进入细胞后,在细胞浆中被其自身携带的逆转录酶逆转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白或产生RNAi干扰。
逆转录病毒包装服务
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