慢病毒包装试剂盒

 
 
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发货 江苏南京市付款后3天内
库存 1000盒起订1盒
品牌 江苑生物
规格 10T
货号 JY03021
过期 长期有效
更新 2022-08-05 12:14
 
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南京江苑生物科技有限公司

企业会员第3年
资料未认证
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详细说明

产品简介

江苑生物的慢病毒包装试剂盒(Lentiviral Packaging Kit)由优化的慢病毒包装辅助质粒混合物(Packaging Mix)、表达eGFP蛋白的对照质粒(eGFP Control)和高效的转染试剂(Transfection Reagent)组成,可以兼容第二代和第三代的慢病毒包装质粒。

Lentiviral Mix能够表达病毒包装需要的各种必需成分如:gag基因,编码病毒主要的结构蛋白;pol基因,编码病毒特异性的酶;rev基因,编码调节gagpol基因表达的调节因子;还含有单纯疱疹病毒来源的VSV-G基因,提供病毒包装所需要的包膜蛋白。江苑生物的慢病毒包装系统产生的慢病毒为“自杀”性病毒,即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞,也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒。慢病毒中的毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代,属于假型病毒。

本试剂盒具有慢病毒包装时间周期短(一周之内即可获得纯化好的高滴度慢病毒)和病毒滴度高的优势,可应用于针对不同基因和药物靶标的细胞学实验和整体动物实验。非常适合于病毒包装初试者。

产品组分

组分名称

储存

产品货号/规格

JY03021

JY03022

JY03023

Packaging Mix

-20℃

150 μL

300 μL

600 μL

eGFP Control

-20℃

7.5 μg

7.5 μg

7.5 μg

Transfection Reagent

4℃

240 μL

480 μL

960 μL

保存条件

冰袋运输。Transfection Reagent 4 ºC保存,长期不使用可-20ºC保存。其余组分均于-20℃保存, 避免反复冻融。保质期1年有效。

注意事项

1.废弃的含病毒的培养基中加入84消毒液(1:20左右),浸泡1天后丢弃。接触过病毒的枪头,离心管,培养板等其他物品可用84消毒液稀释液处理,也可以用煮沸处理半小时或常规灭菌(121℃20 min)。

2.本产品仅用于科学研究。

3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

还需准备的其他实验材料

1.表达目的基因的慢病毒载体质粒:在慢病毒包装前,需要先获得感兴趣的目的基因慢病毒载体,该载体可能表达目的基因、shRNAmicroRNA等。以无内毒素高纯度的试剂盒提取表达目的基因的慢病毒载体质粒,并将质粒DNA溶于无菌的TEddH2O中,测定其浓度及纯度,保证质粒DNAA260/A2801.8-2.0之间。江苑生物提供基因过表达、shRNA/miRNA介导的基因沉默、CRISPR/Cas9介导的基因敲除等服务

2.慢病毒包装用293T细胞株:良好的细胞状态对病毒的包装至关重要,避免细胞培养基有细菌、真菌或支原体的污染,尽量使用传代次数较少的细胞,如果细胞是刚复苏的话,更好传两代之后再包装。

3.细胞培养基,血清和双抗等

4.其他常用实验耗材(如10 cm培养皿,离心管等)

使用说明

10 cm培养皿为例:

1.293T细胞分盘:转染前,将293T细胞以合适的比例传代到10 cm培养皿中,当细胞长到70%-90%时准备转染。

注:细胞要充分消化,成团细胞影响转染效率。

2.转染前换液:转染前将需要转染的细胞换成新鲜的完全培养基(含有血清和抗生素),10 mL/10 cm皿。注:293T细胞贴壁性不是很好,换液时应小心滴加尽量避免冲起细胞。抗生素和血清不会影响转染效率,也不会在细胞转染后导致细胞毒性。

3.转染:取无菌的离心管,加入750 μL DMEM(不含血清和抗生素),7.5 μg表达目的基因的慢病毒载体质粒(自行提供),和15 μL Packaging Mix,用枪轻轻吹打混匀;再加入25 μL Transfection Reagent,用枪轻轻吹打混匀,请特别注意不可Vortex或离心。将混合液均匀滴加到提前换液的培养皿中,轻轻混匀,置于培养箱中培养,后续无需在数小时后更换培养液。

DMEM

750 μL

表达目的基因慢病毒载体质粒

(或者eGFP Control,作为对照)

7.5 μg

(eGFP Control 7.5 μg)

Packaging Mix

15 μL

Transfection Reagent

25 μL

注:上述混合液室温存放6 h内稳定。

4.病毒收集:转染36 h左右后,吸取上清至新的离心管中,4保存。另外添加10 mL新鲜的完全培养基到细胞中,注意不要冲起细胞。再次大约36 h后,收取上清至同一个离心管中。将两次收集的上清用0.45 μm滤器过滤后转移到新的离心管中(若没有0.45 μm滤器,将上清3000 rpm4 ℃离心5 min,弃沉淀亦可)。此时上清液中的病毒颗粒可以直接检测滴度或者感染目的细胞,如果对病毒的滴度及纯度有较高要求,可对上清液进行浓缩与纯化。

注:如果使用滤器过滤,只能使用低蛋白结合力的纤维素醋酸酯或聚醚砜(PES)膜,不能用硝酸纤维素膜(NC)。

5.(可选)慢病毒浓缩:可以使用江苑生物的慢病毒浓缩试剂盒(JY03011进行慢病毒浓缩,效率更高。同时,也可以自行配制PEG-8000慢病毒浓缩液浓缩慢病毒。

6.病毒分装与保存:将病毒上清或浓缩后的病毒分装,保存于-80℃

注:病毒液一定要分装,切忌反复冻融,冻融一次病毒滴度将降低20-60%

293T 慢病毒包装.jpg

1 江苑生物与**公司慢病毒包装试剂盒包装效率比较

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