荧光定量PCR的基本原理就是在PCR扩增过程中,随着PCR循环数的递增,PCR产物不断积累,荧光信号也会相应的增加,这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测。本公司根据您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探针法。通过对DNA或RNA的荧光定量PCR监测, 实现基因的相对定量、绝对定量和定性分析。
图1:荧光定量PCR扩增曲线
二、与RT-PCR相比,荧光定量PCR具有以下技术优势:
1、实时监测:通过扩增曲线能够实时监测PCR产物的积累。
2、特异性强:实验完成后,溶解曲线的分析可以验证扩增产物的特异性,降低假阳性。
3、精确定量:利用扩增进入指数增长期的CT值来定量测定起始模板量,从而实现了极为精确的核酸定量检测。
图2:荧光定量PCR溶解曲线
三、技术服务内容
1、RNA抽提与定量;
2、引物设计及荧光定量PCR、数据分析;
3、技术服务实验报告提交。
四、送样须知:
1、技术服务咨询:在您开始实验之前,本公司将为竭诚您提供好有效的荧光定量PCR技术服务方案。
2、由于荧光定量PCR可以检测任何类型样本中基因的表达量,如组织、细胞、细菌等材料。因此本公司接受任何类型的样本,对于不同的样本需要的量有所不同,具体需要量请咨询本公司,
3、不推荐提供RNA或cDNA样品,除非您能充分证明所提供RNA/cDNA是高质量的且可用于荧光定量PCR。
4、客户提供尽可能详细的背景信息;物种信息,扩增目的基因的NCBI登录号等。
5、客户可以提供荧光定量PCR引物,如果没有引物,本公司可以设计合成,但要另外收取费用。
6、运输要求,液氮或干冰保存寄送,广州本地客户可上门收样。
注:样本应避免各类污染和反复冻融。
五、荧光定量PCR实验服务报告内容:
1、RNA浓度及荧光定量PCR原始数据及分析结果;
2、荧光定量PCR完整的实验步骤、使用仪器、软件设置参数等。
六、实验服务周期及收费标准:咨询本公司
七、质量承诺
1、严谨的实验设计,每个样品至少三个平行对照,保证实验结果的准确性。
2、荧光定量PCR后,分析溶解曲线,保证产物的特异性。