ATPlite试剂盒纯化方法:
细胞破碎后,常使用吸附材料结合方法去除杂质和纯化DNA,主要有硅基质材料、阴离子交换树脂和磁珠等。因硅基质材料可特异吸附核酸DNA,使用方便、快捷,不需要使用有毒溶剂如酚、氯仿等,使得提取基因组像过滤一样简单,因此硅基质材料成为大规模分离纯化DNA的通用方法。
硅基质材料吸附核酸的原理:主要利用DNA在高盐低pH值环境下与硅基质材料相结合,在低盐高pH值环境下与硅基质材料脱离的特征。其机理可能是高浓度盐离子破坏了硅基质水分子结构,形成阳离子桥,当盐被清除后,再水化的硅石破坏了基质和DNA之间的吸引力,因而DNA从硅基质上被洗脱下来。
ATPlite试剂盒注意事项:
尽量简化操作步骤,缩短提取过程,以减少各种有害因素对核酸的破坏。
减少化学物质对DNA的降解,为避免过酸、过碱对DNA双链中磷酸二酯键的破坏,操作多在pH值4.0-10.0的条件下进行。
防止基因组DNA的生物降解,主要是DNase降解基因组DNA,DNase需二价金属阳离子如Mg2等的激活,可用EDTA等金属离子螫和剂和Mg2以抑制DNase的活性。
减少物理因素对DNA的降解,物理降解因素主要包括机械剪切力(如剧烈振荡、搅拌等),细胞突然置于低渗液中导致的细胞爆炸式破裂,DNase大量释放,样品反复冻融和周温等。
ATPlite试剂盒
http://www.univanti.cn/Products-37084388.html
https://www.chem17.com/st272092/product_37084388.html