- 拿到细胞后,先用酒精棉球擦拭培养瓶外部,再在显微镜下观察,看细胞是否悬浮,如果悬浮,吸出培养基,放入离心管,离心,倒掉上层培养基,加入5ml 新的DMEM 高糖培养基(+10%FBS),重悬,放入培养瓶,再放进37℃,5%CO2 的培养箱中。
- 如果细胞正常贴壁,先吸出一部分培养基,放入温箱中稳定一段时间,再根据细胞生长状况和实验需要进行处理。 传代:先倒掉旧的培养基,然后用D-hank’s缓冲液洗两遍,再加1ml 0.25%的胰蛋白酶消化液,在显微镜下观察,等到细胞完全脱落下来,加5ml新的培养基终止消化,用移液管吹散,根据细胞量在细胞培养瓶内留下一部分细胞,其他吸出去,然后在培养瓶内加满5ml培养基。再放到37℃,5%CO2 的培养箱中。
换液:用D-hank’s缓冲液洗一遍,再加入新的5ml培养基,在放入37℃,5%CO2 的培养箱中。
注意:上述处理细胞的步骤都要在洁净台里面操作。
胎牛血清的处理:
没有灭活的血清中含有补体成分,需要将血清在60℃条件下灭活30 min。在水浴锅内进行,灭活的过程中,要不停的摇晃,是受热均匀,防止沉淀析出来。灭活后的胎牛血清好好分装后放置-20℃,分装的目的是为了防止血清的反复冻融。
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