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2005年，主演海岩编剧的电视剧《金耳环》[2]  。2006年，主演特工谍战剧《五号特工组》[3]  。2009年，因在古装大戏《美人心计》中一人出色分饰三个性格迥异的角色而获得业界和观众的一致好评。[4] 

2012年，在电视剧《北京青年》中颠覆形象饰演精神病患者任知了。2013年，参加真人秀节目《星跳水立方》获封“素颜女神”。[5] 

2014年，参演电影《前任攻略》。2015年，主演徐静蕾执导的电影《有一个地方只有我们知道》[6]  ，并获得第22届北京大学生电影节好受欢迎女演员奖[7]  和第3届伦敦国际华语电影节好具实力女演员奖[8]  ；同年登上中央电视台元宵晚会表演舞蹈节目《国色天香》。2004年王丽坤凭借出色表现被徐克导演选中出演电视剧《七剑下天山》而出道。

2005年出演电视剧《河流如血》对于王丽坤，可以说具有非同一般的意义，她的表演能力在这部戏中得到了很大的锻炼和提升，也得到了《河流如血》的编剧海岩肯定。[9] 

2006年出演电视剧《爱就爱了》饰十九岁的护校女生张天玉，阳光美丽、纯真善良，她正面临毕业。[10]  在电视剧《五号特工组》 中饰高寒。[11] 

2007年出演电视剧《  家》 饰知识女性琴 。[12] 

2008年出演电视剧《无间有爱》剧中王丽坤所扮演的“小雪”是一个苦命却又乐观坚强的女孩儿，这个角色是从小在剧团长大，虽然只是个小杂工，后来聪明的她在耳濡目染之下，唱作俱佳样样精通，在个偶然的机会下救场而获得满堂喝彩，从此走上舞台。[13]  在电视剧《当铺》 王丽坤饰演的瑞芸香与吴流芳、尤光耀三个人是师兄妹，从小青梅竹马。[14] 

同年还出演了由柳云龙执导的电视剧《血色迷雾》，凭借悬念迭起、扑朔迷离的剧情，引来观众好评如潮，王丽坤饰演的郑晓聪也因此给大家留下了深刻的印象。[15] 

2009年在电视剧《加油优雅》（原名《傻女好牛》）饰康优雅，以贴近生活为本、取悦观众为上的精神，深度描绘了当代青年人的“婚姻爱情观”，表达了构建和谐社会的美好愿望，“其故事、人物、行为、心理、语言、服饰等无不是当下社会中正在流行的元素，与当今青年男女具有极强的共通、共容性，剧集所表现的每个细节，都将引起社会中此类人群的关注和共识。”[16] 

2010年在古装大戏《美人心计》中一人出色分饰三个性格迥异的角色而获得一致好评。

同年王丽坤和柳云龙再次牵手电视剧《告密者》。[17-18]  及谍战剧《迷案1937》（原名《上海迷案-1937》）饰演一对性格迥异的双胞胎姐妹李梦露与李梦珠，堪称本剧一对养眼的“双生花”。[19] 

2011年在《青盲之越狱》 王丽坤此次在剧中饰演的女军医王玲雨在剧中也承担了主要的情感线索，她与于和伟、沙溢之间的“三角之恋”为这部谍战大戏增添了更多的情感色彩。[20] 

2011年在现代剧《盛女的黄金时代》（原名《剩女的黄金时代》）饰梁爽步入剩女行列之后所遭遇的婚姻问题，她的父母为了能够谋得一位乘龙快婿，不惜亲自出马代替梁爽相亲。[21] 

2011年出演电视剧《五号特工组2》饰高寒，剧中于震饰演的马云飞与王丽坤饰演的高寒可谓“特工圈”的“史密斯夫妇”。

2012年出演现代剧《婚巢》 饰阳雪，王丽坤在剧中被导演林黎胜要求素颜出镜，她用贴近现实的方式演绎了80后新媳妇阳雪的结婚经历[22]  。

2012年抗战剧《连环套》 王丽坤在剧中饰演八路军女播音员马小茴，为了完成中共的一套惊险计划，与孟庆凡假扮夫妻，潜伏于日本人的警戒之下[23-24]  。

2012年在电视剧《北京青年》中饰演了精神病患者任知了让她人气剧增。

2013年在电视剧《理发师》 饰演富家千金宋嘉仪与上海理发师陆平生之间坎坷的经历，侧面描绘出乱世背景中小人物的凄美爱情。[25] 

2013年出演电视剧《零下三十八度》剧中，于和伟、王丽坤所饰演的年定邦、常青夫妻，在各自的特工身份之外，就是普通得不能再普通的恩爱夫妻。[26] 

2015年3月4日，在中央电视台元宵晚会上，表演舞蹈《国色天香》。[27]  4月16日，主演的电视剧《想明白了再结婚》在浙江卫视、深圳卫视联合播出。[28]  2015年与郑元畅、金范主演的电影《重生爱人》于5月15日上映。[29]  同时与刘恺威合作主演的电视剧《两生花》于6月12日在浙江卫视、江苏卫视播出。[30]